수용성 SEC (For Protein, IgG, mAb)

더 안정적이고 정밀한 단백질 분석을 시도해보시지 않으시겠습니까?

단백질 의약품, 항체 의약품 분석에 최적

단백질 및 펩타이드 분석은 바이오, 의약, 식품분야 등의 연구에서 이루어지고 있습니다. 특히 각종 분리모드를 이용하여 분석하는 HPLC는 단백질 펩타이드 분석에 있어 가장 일반적인 분석 방법 중에 하나입니다. 그중 겔 여과 크로마토그래피(SEC)는 분자량의 차가 충분한 샘플이나, 항체 단백질 중 Monomer, Dimer, Trimer의 분리가 필요한 경우에 일반적으로 사용되고 있습니다.

Shodex는 단백질 분석에 대한 다양한 분석 솔루션을 제공하고 있습니다.

■ 일반 단백질 분석 컬럼 : KW-800 Series

■ 고성능 컬럼 : KW400 Series

■ 항체단백질 분석전용 컬럼 : LW-800 Series, LW-403 4D

SEC(GFC)는 어떠한 방식으로?
크기배제크로마토그래피(SEC)는 이론적으로 ‘어떠한 화학적 상호작용 없이 컬럼 내 Pore를 이용하여 물리적인 방식으로 분리하는 크로마토그래피’를 칭합니다. 따라서 Gel Pore에 조금 더 오랫동안 머물 수 있는 분자량이 작은 샘플이 가장 나중에 용출되는 원리입니다.

(이론적인 SEC Gel. 하지만 실제로는 Functional group이 결합되어 있습니다)

(일반적인 SEC분석은 분자량이 큰->작은 순서로 용출됩니다)

단, 일반적으로 수용성 SEC의 경우에는 실제로 다양한 화학적 상호작용이 분석 시 작용합니다.

이러한 화학적 상호작용으로는

■ 컬럼 Gel과 샘플과의 화학적 상호작용(친수성, 소수성)

■ 컬럼 Gel과 샘플과의 이온적 상호작용(흡착, 배제)

■ 컬럼 Gel의 Functional group에 따른 화학적 상호작용

외에도 다양한 요소가 혼재하고 있습니다.

단백질 분석용 컬럼과 같은 수용성 SEC컬럼의 경우에는 일반적으로 친수성 샘플을 끌어당기기 위해 Diol과 같은 Functional group을 결합시키기도 합니다.

또한, 이동상 조건 및 샘플 특성(단백질의 +극성, -극성에 의한 화학적 특성)에 따라 컬럼에 흡착하는 등과 같은 문제가 발생할 수 있기 때문에 이동상에 소량의 염(salt)를 첨가하거나 pH를 조절하는 과정을 수행하기도 합니다.

컬럼 Grade의 선택

SEC컬럼은 샘플의 분자량에 따라 적절한 Poresize(분자량 측정 가능 범위)를 가지는 컬럼을 선택해야 합니다.

Protein KW Column Specification

(Gel : Silica)

#단백질, 효소, 항체 분석, #USP L20, L33, L59, #KW400 : 높은 감도&분리능

단백질 분석의 표준

단백질 및 효소 분석에 적합한 표준 컬럼입니다.

표준 컬럼

Product
code

Product name

Plate number
(TPN/column)

Particle
size
(μm)

Pore Size

(Å)

Size (mm)
I.D. x Length

Shipping Solvent

F6989000

F6989103

F6989104

F6700131

Protein KW-802.5

Protein KW-803

Protein KW-804

Protein KW-G 6B

≥ 21,000

≥ 16,000

(Guard column)

400

1,000

1,500

–

8.0 x 300

6.0 x 50

H₂O

Product name	Max. usable pressure (MPa)	Usual flow rate (mL/min)	Max. usable flow rate (mL/min)	Usable temp. range (°C)	Usable pH range	Usable salt conc.
KW-802.5 KW-803 KW-804 KW-G 6B	5.0 5.0 5.0 –	1.0 1.0 1.0 –	1.5 1.5 1.5 –	45 45 45 45	3.0 to 7.5 3.0 to 7.5 3.0 to 7.5 3.0 to 7.5	≤ 0.3 M ≤ 0.3 M ≤ 0.3 M ≤ 0.3 M

측정 가능 분자량 범위

<단백질로 측정 시> Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer(pH 7.0) + 0.3M NaCl, Protein

Product name	Target molecular weight range	Exclusion limit
KW-802.5 KW-803 KW-804	5,000 – 100,000 10,000 – 700,000 30,000 – ^**(4,000,000)	150,000 ^(1,000,000) ^(4,000,000)

**() : 추정치

<플루란(Pullulan)으로 측정 시> Eluent : H₂O

Product name	Target molecular weight range	Exclusion limit
KW-802.5 KW-803 KW-804	5,000 – 100,000 10,000 – 700,000 30,000 – ^**(4,000,000)	150,000 ^(1,000,000) ^(4,000,000)

Semi-micro 컬럼

Product
code

Product name

Plate number
(TPN/column)

Particle
size
(μm)

Pore Size

(Å)

Size (mm)
I.D. x Length

Shipping Solvent

F6989201

F6989202

F6989203

F6989204

F6700132

KW402.5-4F

KW403-4F

KW404-4F

KW405-4F

KW400G-4A

≥ 35,000

≥ 25,000

(Guard column)

400

800

1,500

2,000

–

4.6 x 300

4.6 x 10

H₂O

Product name	Max. usable pressure (MPa)	Usual flow rate (mL/min)	Max. usable flow rate (mL/min)	Usable temp. range (°C)	Usable pH range	Usable salt conc.
KW402.5-4F KW403-4F KW404-4F KW405-4F KW400G-4A	10 10 7 7 –	0.35 0.35 0.35 0.35 –	0.5 0.5 0.5 0.5 –	5 to 45 5 to 45 5 to 45 5 to 45 5 to 45	3.0 to 7.5 3.0 to 7.5 3.0 to 7.5 3.0 to 7.5 3.0 to 7.5	≤ 0.3 M ≤ 0.3 M ≤ 0.3 M ≤ 0.3 M ≤ 0.3 M

측정 가능 분자량 범위

<단백질로 측정 시> Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer(pH 7.0) + 0.3M NaCl, Protein

Product name	Target molecular weight range	Exclusion limit
KW402.5 KW403 KW404 KW405	5,000 – 70,000 10,000 – 500,000 30,000 – ^(4,000,000) 200,000 – ^(20,000,000)	150,000 600,000 ^(4,000,000) ^(20,000,000)

**() : 추정치

<플루란(Pullulan)으로 측정 시> Eluent : H₂O

Product name	Target molecular weight range	Exclusion limit
KW402.5 KW403 KW404 KW405	2,000 – 40,000 3,000 – 50,000 20,000 – 300,000 100,000 – 700,000	60,000 80,000 400,000 1,300,000

이동상 조건

Product name	Methanol(MeOH)	Acetonitrile(ACN)	THF	Water solusion
Protein KW	0 to 100%	0 to 100%	0%	0 to 100%

4. KW-800, KW400의 성능&분리능 비교

컬럼 세정법(공통)

① 컬럼을 역방향(Reverse)으로 연결하고 0.5mL/min조건으로 세팅합니다.(KW400은 0.15mL/min)

② 세정 시 필요한 이동상의 부피는 컬럼 부피의 5~10배 정도입니다(약 ~50mL)

③ 단백질이 흡착되었을 경우 0.5M salt 혹은 Phosphate buffer(pH 3.0정도)를 흘려 주시기 바랍니다.

④ 소수성 물질이 흡착되었을 경우 10~20% ACN 혹은 MeOH가 포함된 이동상을 사용해주시기 바랍니다.

Protein LW Column Specification

(Gel : Silica)

#향상된 항체 분리능, #USP L20, L33, L59, #LW-403 4D : 신속분석

향상된 단백질 분석 능력

Shodex Protein LW컬럼은 기존의 KW컬럼에서 분리능과 분석 안정성을 개선시킨 컬럼입니다. 항체 분석 시 Monomer와 Dimer의 분리를 보다 안정적으로 수행할 수 있게 하였으며 MALS분석 시 Baseline noise도 최소화 하여 낮은 농도에서도 분석이 가능합니다.

아래는 KW-803컬럼과 LW-803컬럼의 BSA의 분석 분리능을 비교하였습니다.

표준 컬럼 & 신속 분석 컬럼

Product
code

Product name

Plate number
(TPN/column)

Particle
size
(μm)

Pore Size

(Å)

Size (mm)
I.D. x Length

Shipping Solvent

F6989303

F6700113

Protein LW-803

Protein LW-G 6B

≥ 25,000

(Guard column)

1,000

–

8.0 x 300

6.0 x 50

H₂O

F6989403

F6700134

Protein LW-403 4D

Protein LS-G 4J

≥ 11,000

(Guard column)

1.9

400

–

4.6 x 150

4.6 x 20

H₂O

Product name	Max. usable pressure (MPa)	Usual flow rate (mL/min)	Max. usable flow rate (mL/min)	Usable temp. range (°C)	Usable pH range	Usable salt conc.
LW-803 LW-G 6B	15 –	1.0 –	1.5 –	4 to 45 4 to 45	3.0 to 7.5 3.0 to 7.5	≤ 0.3 M ≤ 0.3 M
LW-403 4D LS-G 4J	20 20	0.35 0.35	0.5 0.5	4 to 45 4 to 45	3.0 to 7.5 3.0 to 7.5	≤ 0.3 M ≤ 0.3 M

측정 가능 분자량 범위

<단백질로 측정 시> Eluent : 50mM Sodium phosphate buffer(pH 7.0) + 0.3M NaCl, Protein

Product name	Target molecular weight range	Exclusion limit
LW-803	10,000 – 700,000	^**(1,000,000)
LW-403 4D	10,000 – 700,000	^**(1,000,000)

**() : 추정치

이동상 조건

Product name	Methanol(MeOH)	Acetonitrile(ACN)	THF	Water solusion
Protein LW	0 to 100%	0 to 100%	0%	0 to 100%

LW-803, LW-403 4D 성능 비교 Plot
컬럼 세정법(공통)
① 컬럼을 역방향(Reverse)으로 연결하고 0.5mL/min조건으로 세팅합니다. (LW-403은 0.15mL/min)
② 세정 시 필요한 이동상의 부피는 컬럼 부피의 5~10배 정도입니다(약 ~50mL)
③ 단백질이 흡착되었을 경우 0.5M salt 혹은 Phosphate buffer(pH 3.0정도)를 흘려 주시기 바랍니다.
④ 소수성 물질이 흡착되었을 경우 10~20% ACN 혹은 MeOH가 포함된 이동상을 사용해주시기 바랍니다.